孢子分离法也称为孢子弹射分离法，是利用某些药用真菌子实体成熟后自行弹射孢子的特性，在无菌条件下，使弹射的孢子落到适宜培养基上，在适宜条件下进行培养，孢子萌发成菌丝，从而获得纯菌种的一种方法。近期有种植灵芝的网友咨询耕种帮：如何用孢子分离法制备灵芝母种？用孢子分离法制备灵芝母种需要注意什么？
用孢子分离法制备灵芝母种方法
1、配制培养基：常用的培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基或马铃薯蔗糖琼脂培养基。
2、种芝选择：所选种芝应从原基形成期开始标记，选择出芝早、子实体完整、柄短粗壮、颜色均匀的个体，待长至七八成熟时采下。
3、灵芝菌盖表面消毒：将采回的种芝剪去菌柄，除掉菌盖上粘附的杂质，放入无菌室或接种箱内的0.1％升汞溶液内，浸泡1～2分钟，取出用无菌水冲洗两次，用无菌纱布吸干表面水分。
4、灵芝孢子收集器制作及灭菌：灵芝孢子收集器可自己制作。用一个直径为13厘米的培养皿作底盘，盘中放一直径为9厘米的小培养皿，用来收集孢子。小培养皿中放一不锈钢支架，用来支撑种芝。用一直径为12厘米的玻璃漏斗罩着小培养皿，漏斗口用棉塞塞好。制好的孢子收集器用双层牛皮纸包好，放入灭菌锅内灭菌。
5、灵芝孢子的收集：将灭菌后的孢子收集器放入接种箱，在无菌条件下把处理过的种芝插在收集器不锈钢架上，盖上漏斗。沿漏斗下沿四周放一条纱布，在大培养皿中倒入0.1％升汞溶液，以浸透纱布为度，防止外界杂菌透过缝隙进入漏斗。再将孢子收集器放入恒温箱，温度调至25℃。两天后，灵芝担孢子开始弹射，并落在小培养皿内，可透过玻璃漏斗看到培养皿底部散落的棕色孢子。
6、灵芝孢子的培养：把孢子收集器重新放回接种箱内，在无菌条件下，用接种环粘取少量孢子接种到试管的斜面培养基上，然后将这些试管放入25℃～28℃的恒温箱内，经过7天左右，孢子会萌发成菌丝。选择孢子萌发早、菌丝长势旺盛的菌落，将菌丝转接到新的试管中，再经7天培养，菌丝会发满全管，即得灵芝母种。