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　　二氧化碳对灵芝生长发育的影响

　　空气中二氧化碳的浓度为0.03%灵芝菌丝可正常生长，如二氧化碳的浓度增加，可促进菌丝的生长。研究表明；如温度条件不变，当二氧化碳的浓度增加到0.1%时，菌丝生长速度加快。当菌丝由营养生长转向繁殖生长时，如二氧化碳的浓度为0.034%时，可加速分化，但高于0.1%时，则抑制分化。在温度较高、湿度较大的条件下，二氧化碳浓度偏高会抑制菌丝生长，甚至会导致腐烂。

　　灵芝子实体生长期内，所需二氧化碳浓度不应超过0.03%为宜，浓度高于0.1%时，虽可促进菌柄的生长，但不能形成菌盖，只能形成鹿角状多分枝的畸形子实体。

　　需要注意的是灵芝子实体从原基形成到菌蕾的生长均需充足新鲜的氧气，空气中二氧化碳浓度超过0.1%时，菌盖的生长发育就受到抑制，而发生多分枝、鹿角状的菌柄；二氧化碳浓度达0.1%，对菌柄生长有明显的促进作用；二氧化碳浓度超过0.3%时菌蕾就不能形成。生产中，灵芝子实体发生室二氧化碳浓度应控制在0.1%以下，才能使菌盖正常健壮地生长。

　　适宜灵芝生长的基质含水量

　　用固体培养基栽培灵芝时，固体培养料中最适宜的含水量一般在55%~60%左右。当基质中的含水量为30%~80%的范围内时，菌丝可以生长，如基质中含水量低于30%，菌丝则处于休眠状态，停止生长或分化。如含水量高于80%时，由于基质中氧气含量过低，也会导致菌丝休眠，或者腐烂。

　　段木栽培灵芝适宜接种时间

　　灵芝在我国南方各地适宜栽培的时间较广，在我国北方则需要根据灵芝的生长习性和生长周期选择确定，合理安排主产季节。灵芝是一种高温恒温出菇真菌，在生长发育过程中要求较高的温度。其温度范围为3~40℃，以26~28℃为最佳。菌丝最适的温度为28℃，低于25℃生长受到明显抑制，高于32℃菌丝可衰老自溶。子实体的生长适温为24~28℃，在18℃以下则不能正常生长。灵芝原基形成和子实体生长阶段不需要温差刺激，属于恒温结实型菌类，温差过大，可产生畸形芝。所以生产的接种季节，安排在11月下旬至次年1月下旬，或2月中旬至3月上旬，当年均可收获两批子实体。

　　砍伐灵芝段木时间

　　砍伐时间与灵芝栽培季节基本一致：一般是在树木休眠期进行，在未抽芽前最好，此时树干贮藏较多的养分。海拔较高及纬度较高地区砍伐期还可以早些，选择11月中旬。在接种前15天砍伐较好。如果2月中旬至3月上旬接种，砍伐期选在2月，超过3月底接种，会影响子实体产量。树砍伐后，砍枝要顺枝砍，不要倒砍，以免伤害主干的树皮，树皮与木质部结构紧密不易脱皮，有利于保持水分和养分。以质硬为好，直径不小于6厘米，不大于22厘米，以8~18厘米为宜，砍伐运输过程中，尽可能保持树皮完整。

　　栽培灵芝用的消毒剂配制方法

　　1、升汞溶液：常用的表面消毒剂是0.1%的升汞溶液。用升汞20克，先溶于100毫升浓盐酸中成原液。配制消毒液时，取原液5毫升，加蒸馏水995毫升稀释后使用。升汞消毒液也可直接配制，取升汞1克，溶于25毫升浓盐酸中，然后加水至1000毫升。盐酸的作用主要在于增加升汞的溶解度，并有增加杀菌能力的效果。升汞对人有强毒性，故在配制好的溶液中可加入几滴红色染料或甲烯蓝，使无色的升汞液变成红色或蓝色，防止误食。

　　2、漂白粉：将10克漂白粉加入140毫升水中，过滤后使用，或摇动沉淀后用其上清液，漂白粉有挥发性，新配制有效的溶液有强烈的氯气臭味，应在使用前临时配制，存放太久丧失杀菌能力。其杀菌力较升汞差。成分也不太稳定，消毒效果不一致，它适合于对升汞比较敏感的真菌作组织分离时消毒用，一般处理3~5分钟。

　　3、酒精和其他表面消毒剂：常用70%的酒精擦拭分离部位或浸泡几秒到1分钟，进行表面消毒，其简单的稀释配制方法如下：

　　其中：a——原液的浓度；b——用于稀释溶液的浓度，若用水稀释则为0；c——所需要的浓度；d——c和b的差，也即原液加人的份数；e——a和c的差，也即稀释液加入的份数。

　　灵芝的分离、培养和生产过程用高压灭菌器时注意事项

    1、按照灭菌器要求的注水量，加水到指定的标度，最好加入开水，一方面可缩短升温时间，同时避免长期使用冷水锅内结水碱。

　　2、将需要灭菌的培养基或器物放在灭菌器内。装入的试管、菌种瓶等物不宜过挤，以利热蒸汽流通，特别是袋装培养基不能叠放紧压，妨碍蒸汽渗透，造成灭菌不彻底。需灭菌的器物装好后，将灭菌器的盖密封，不能漏气，然后打开放气阀门。

　　3、接通电源或打开锅炉的进汽阀门加热。

　　4、排除干净锅内的冷空气，是高压灭菌最重要又容易被人忽略的步骤。空气的导热性能要比水蒸气差，潜热很小，但其热膨胀系数较大，灭菌锅内存有较多的冷空气。因此，灭菌时排出锅中的冷空气非常必要。排放冷空气的方法有两种，一种是当水加沸腾后空气由已打开的放气阀门排出，等蒸汽从气门有力地冲出后，说明空气已排完，可关闭气门继续加热；另一种方法是加热后不开气门，当气压表的指针上升到0.5千克/厘米2时，打开放气阀门，排出冷空气，指针降至零后，再关上放气阀继续加热。

　　5、当压力上升到所需要的指标后，开始计算灭菌时间，灭菌过程中保持压力稳定，不能忽高、忽低，特别应该注意安全阀门，如果安全阀失灵，当压力超过灭菌器最大的承受能力，会出现意外事故。

　　6、达到灭菌要求的时间后，关掉热源停止加热，排出蒸汽使压力慢慢下降。排气的速度应适当。若排得太快，增大瓶内外的压力差，灭菌器中试管或三角瓶中的培养基会突然沸腾，冲脱瓶塞或沾污棉花塞；排得太慢，等于延长了灭菌时间，对一些培养基是不利的。琼脂试管培养基和液体培养基，灭菌后去掉热源，让其自然排气，当压力表指针降至零时方可打开锅，一般来说，从排气到打开灭菌锅的时间约为8~12分钟。塑料袋培养料灭菌时，应让其自然冷却，当压力下降到0.5千克/厘米2时，再打开排气阀门放气，以免在减压过程中，袋内外产生压力差，击穿塑料袋导致污染杂菌。

　　7、防止弄湿棉塞。灭菌前应将试管的棉花塞用油纸或塑料薄膜包好，灭菌时瓶子的棉塞不能接触灭菌锅壁，瓶子上面应盖铝帽或防水油纸，以免锅盖内面的水流到棉塞上。若棉塞潮湿，可在锅中烘烤一定时间再出锅。

　　灵芝采用短段木熟料栽培优点

　　灵芝短段熟料栽培生长周期短，生物转化率高，生产1000千克灵芝约耗段木25立方米，每立方米木材两年可产干灵芝约40千克。通过高温、高压使段木中的营养成分被有效降解，易被灵芝菌丝分解与吸收，加上高温灭菌，污染机会少，故成品率高。栽培的灵芝外形美观、光泽鲜艳、出芝期基本一致，芝形大小整齐，可连续采收。但耗费木材量大，仅适合在木材充裕的地方推广。

　　灵芝是一类食药兼用的大型真菌，两千多年前编著的《神农本草经》就对灵芝有了详细的记载，认为灵芝“久食轻身不老，延年神仙”，被称为“仙草”“瑞草”，因此有不少网友考虑种植灵芝。近期有网友咨询耕种帮：种植的灵芝什么时候能采收？灵芝现蕾之后多少天可以采收？

　　灵芝适宜采收时期

　　短段木栽培灵芝当菌盖不再增大，盖面色泽同菌柄，盖边缘有同盖色泽一致的卷边圈，有褐色孢子飞散，盖背面色泽一致时便可采收。从芝蕾出现到采收一般要40~45天。采收时可用剪子或手将芝体从菌柄基部剪下或摘下。剪下芝体后的剩余菌柄亦应摘除，否则很快从老柄上方长出朵形很小或畸形芝体。第一批子实体采收后，不久会出现第二批芝体，依短段直径大小不同，可收灵芝2~3年。袋栽和瓶栽灵芝的采收加工与段木栽培灵芝相同。

　　灵芝孢子产生时期

　　当灵芝子实层初期为米黄色，此时菌孔呈封闭状，当到末期转变成黄褐色，菌孔呈开张状态，成熟的孢子就可以从菌孔中散发出来，咖啡色，此时灵芝已由生长阶段转变为繁殖阶段，这时需马上进行孢子粉的收集。

　　灵芝孢子收集方法

　　代料栽培灵芝可以在栽培产地铺上塑料纸进行收集，该法简单、耗费劳动量较少，然后收集落在铺在地上的塑料纸上的孢子粉。另外，也可以套纸袋收集，该法相对费工，但所获孢子粉比较纯净。套袋收集时要适当，过早，灵芝子实体伸出袋外形成畸形灵芝；过迟，则影响孢子粉的产量。

　　段木栽培、瓶栽灵芝孢子粉的收集可以采用套袋。具体方法如前面瓶栽灵芝孢子粉的收集。如是段木栽培，套住灵芝菌盖与菌柄的上半部即可。灵芝孢子粉的散发时间大约可以持续15~20天。

　　灵芝含有的化学成分

　　灵芝的化学成分复杂，目前已知含有多糖（肽）类、三萜类、核苷类、生物碱、氨基酸及微量元素等。

　　（1）灵芝多糖：有水溶性多糖、酸性多糖和碱性多糖。灵芝多糖以杂多糖为主，主要含有D-葡萄糖、D木糖、D-甘露糖、D-半乳糖、D-岩藻糖、L-阿拉伯糖、L-鼠李糖等单糖组成。

　　（2）三萜类化合物：是从灵芝中分离得到的另一类具有生物活性的主要有效成分，目前已从灵芝中分离得到100余种三萜类化合物，多数为高度氧化的羊毛甾烷衍生物。主要有：灵芝酸（gandenic acid）A、B、C、D、E、G、I、L、a、DM、ma、mb、me、md、mg，赤芝酸（lucidunic acid）A、B、C、D、E、F、O，灵芝-22-烯酸，灵芝草酸，丹芝酸，灵芝孢子酸，赤芝孢子内脂A、B，灵芝醇，丹芝醇A，环氧灵芝醇A、B、C等。

　　（3）核苷类：组成RNA、DNA必不可少的重要物质。灵芝中含有尿嘧啶、腺嘌呤、腺苷、尿苷等成分。

　　（4）生物碱类：从灵芝子实体或孢子粉中分离得到胆碱、甜菜碱、?-三甲胺基丁酸、灵芝碱甲和灵芝碱乙等。

　　（5）氨基酸类：灵芝子实体中含有18种氨基酸，其中人体必需氨基酸的相对含量高于50%。

　　（6）微量元素：灵芝子实体中含有锰、铬、铜、铁、钙、钾、镁、锌、硒、锗等多种微量元素。有些微量元素（如锗和砸）对灵芝多糖的抗肿瘤作用有协同作用。

　　灵芝孢子含有的化学成分

　　灵芝孢子的化学成分可分为以下几类：蛋白质和氨基酸类、糖肽类、维生素类、胡萝卜素、甾醇类、三萜类、生物碱类、脂肪酸类、内酯和无机离子等。灵芝孢子蛋白质含量达18%，其中异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、胱氨酸、苯丙氨酸等机体必需氨基酸的含量非常丰富。灵芝孢子中富含多糖和寡糖。从灵芝孢子粉的酸性提取物中分离到了一些三赌类化合物，他们是赤芝孢子酸A、B、C和E。灵芝孢子中的脂肪酸类有二十四烷酸（C）、硬脂酸（C）、棕榈酸（C）、二十二烷酸（C）等。内酯类属五环三萜内酯，有赤芝孢子内酯A和B。生物碱类有胆碱、甜菜碱和硫组氨酸甲基内胺盐。灵芝孢子中的无机元素有钙、磷、铁、镁、钠、锗、硒等，其中有机锗与人体健康和疾病的防治有密切的关系。

　　（1）接种室：也称为无菌室。一般高2~2.2米，面积4~6平米，室内放接种工作台，室顶吊挂30~40瓦的紫外线杀菌灯和日光灯。无菌室外应连接一个2~3平米的缓冲间，缓冲间屋顶应安装紫外线杀菌灯和日光灯各一支。接种间门不能与缓冲间门对着开，防止空气对流。   　

　   （2）接种箱：也称无菌箱，是用木结构安装或有机玻璃制成的密闭箱。一般分为双人和单人两种，双人式接种箱的容积以能放入120~150瓶菌种为宜，接种箱前后有两扇能启动的倾斜度为70度的玻璃窗，窗下部为木质挡板，在挡板上开两个直径13~15厘米，圆心相距50厘米的圆形操作孔。孔口装有具松紧带的套袖。箱顶部为木板，安装紫外线杀菌灯和日光灯各一支，箱顶侧面开直径5~8厘米的排气孔，孔口覆盖8层纱布过滤空气。有的简易接种箱不用紫外灯而采用高锰酸钾与福尔马林熏蒸灭菌或特制的灭菌药。接种箱制造容易，移动方便，而且体积小，消毒比较彻底，适应性较广。   　

　  （3）洁净工作台：也称为超净工作台。是一种通过过滤器除尘、洁净气流，形成保护操作区不受外界干扰的空气幕，使工作区获得洁净空间环境的一种净化设备。操作比较简便，接种数量不受空间的限制。   　　

    （4）接种工具：主要有接种针、接种铲、接种钩、接种耙、接种刀、接种镊子、打孔器等。另外，还有分离用的手术刀、剪刀、榔头等。   　

　（5）培养条件：培养室：要求室内干燥、洁净能保温、保湿，有条件的地方在培养室可以安装空调机。或用电炉加热，可以装配自动控温仪。培养架：放置培养物的架子，用木材、钢材或塑料加工的架子。   　

　另外，还有温度计及干湿温度计、恒温培养箱等。

　　灵芝菌种的保藏冷冻真空干燥法简称冷冻干燥，即将液体的样品在极低温度下快速冷冻，然后经真空干燥，使菌体细胞的结构与成分保持原来状态。该法是采用低温、干燥和真空等手段来保藏菌种，使菌种的新陈代谢活动处于最低水平，达到长期保藏的目的。冷冻干燥是目前应用很广泛，效果较好的一种菌种保藏方法。还有液氮超低温保藏法是将菌种放人装有保护剂的安瓿瓶中，密封后，经控制降温速度冻结，然后贮藏在一196~一150℃液态氮超低温冰箱中。由于超低温能使微生物的代谢能力降到最低水平，因此菌种基本上不发生变异。用这种方法还能保存那些不能用冷冻干燥保藏的菌种。目前，国际上正大力推广应用这一新技术。

　　准备一、无菌室和分离用器具的灭菌和消毒

　　分离菌种的操作过程，应该在很清洁的条件下严格按照无菌操作技术进行，无菌室、无菌箱或洁净工作台都应保持清洁，必要时可用0.1%的升汞溶液或70%的乙醇擦拭工作台。微生物一般都是附着在尘埃上、悬浮于空气中，可在室内喷雾或煮沸沸水的方法，使空气中水汽饱和，尘埃与水滴同时降落，除去空气中的微生物。分离时所用的培养皿、刀剪、接种铲等用具及工作人员的工作服都应进行无菌处理，操作时不能在操作间走动，防止带来杂菌。

　　准备二、消毒液的配制

　　①无菌水。无菌水即为高压灭菌后的自来水。将适量的自来水装入三角瓶中，塞好棉塞，然后进行高压灭菌，装入水量不宜太多，防止高压灭菌时弄湿棉塞。无菌水不应保存时间太久，防止污染。

　　②常用的消毒液。0.1%升汞溶液、漂白粉、70%的酒精溶液。此外，5%福尔马林、3%过氧化氢、2%高锰酸钾等都可用做表面消毒，处理时间和浓度因材料不同而异，处理后都应用无菌水冲洗。

　　③排除细菌污染。细菌污染是分离真菌的大敌，目前抑制细菌生长有效的方法是在培养基中加入适当的抗生素。加金霉素（30微克/毫升）可抑制多数细菌生长，加青霉素（2微克/毫升）可抑制革兰氏阳性细菌生长，加多黏菌素B（0.5微克/毫升）可抑制革兰氏阴性细菌生长，加链霉素40微克/毫升和氯霉素50微克/毫升可以抑制大部分细菌生长，除氯霉素可在制作培养基时灭菌前加入外，其他抗生素都应在培养基灭菌后冷却到45℃左右时再加入。此外，可调节培养基的pH，酸性培养基对大部分细菌都有抑制作用，而并不影响真菌生长。

　　培养基，是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。近期有栽培灵芝的网友咨询耕种帮：常见的灵芝母种培养基有哪些？灵芝母种可使用的培养基有哪些？

　　（1）马铃薯半合成培养基

　　①马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基（简称PDA培养基）。马铃薯（去皮）200克，琼脂18~20克，葡萄糖20克，水1000毫升。也可以用蔗糖20克取代葡萄糖即为PSA培养基。还可以添加磷酸二氢钾3克，硫酸镁1.5克，维生素玖1毫克。适用于灵芝的分离、培养、保藏。

　　②马铃薯、麦芽糖、琼脂培养基。马铃薯（去皮）300克，麦芽糖10克，琼脂18~20克，水1000毫升。

　　（2）玉米粉半合成培养基

　　玉米粉、蔗糖培养基：玉米粉40克，蔗糖10克，琼脂18~20克，水1000毫升。或者在培养基中添加蛋白胨2克或酵母膏10克。适用于保藏菌种。

　　（3）麦麸培养基

　　麦麸150克，硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾1.5克；葡萄糖20克，琼脂18克，水1000毫升。适合于灵芝的菌种分离和培养。

　　（4）酵母浸膏半合成培养基

　　①酵母浸膏葡萄糖琼脂培养基。酵母浸膏2克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。

　　②麦芽糖酵母膏培养基。酵母浸膏5克，麦芽糖15克，磷酸二氢钾1.5克，硫酸镁0.5克，琼脂20克，水1000毫升。

　　以上适用于菌种的分离、保藏。

　　（5）麦芽膏半合成培养基

　　①麦芽膏琼脂培养基（MA）。麦芽膏20克，琼脂20克，水1000毫升。

　　②麦芽膏葡萄糖琼脂培养基（MDDA）。麦芽膏20克，葡萄糖20克，蛋白胨1克，琼脂20克，水1000毫升。

　　适合菌种的分离、保藏。

　　（6）麦芽浸膏综合培养基

　　①麦芽浸膏10克，磷酸铵1克，硫酸铁0.1克，硝酸铵1克，硫酸镁0.1克，硫酸锰0.05克，琼脂20克，水1000毫升。

　　②麦芽浸膏10克，蛋白胨1克，酵母浸膏0.5克，麦芽糖5克，硫酸镁0.5克，磷酸二氢钾0.25克，硝酸钙0.5克，琼脂20克，水1000毫升。

　　以上培养基适合于灵芝菌种的培养。

　　（7）标准培养基

　　①真菌标准琼脂培养基。马铃薯淀粉2克，硫酸镁0.75克，磷酸二氢钾1.25克，葡萄糖10克，天门冬酸胺2克，琼脂15克，水1000毫升。

　　适用于培养观察灵芝菌丝形态。

　　②标准葡萄糖琼脂培养基。葡萄糖15克，琼脂18克，水1000毫升。适用于灵芝分离和纯化。

　　③完全培养基。硫酸镁0.5克，蛋白胨2克，磷酸二氢钾0.46克，葡萄糖20克，磷酸氢二钾1克，维生素氏50毫克，琼脂20克，水1000毫升。适合灵芝的生理、生化研究。

　　（8）察氏琼脂培养基

　　蔗糖30克，硝酸钠3克，硫酸镁0.5克，氯化钾0.5克，硫酸亚铁0.01克，磷酸二氯钾1克，琼脂15克，水1000毫升。适合灵芝的生理、生化研究。

　　（9）天门冬氨酸矿盐培养基

　　天门冬氨酸4克，硫酸镁2克，氯化钙0.1克，磷酸二氢钾4克，磷酸铵2克，碳酸钙0.25克，琼脂15克，水1000毫升。

　　培养灵芝常用的合成培养基，有缓冲作用，适于保藏灵芝菌种。灵芝菌种培养基分几种？

　　培养基是灵芝赖以生存的营养基物，要培养灵芝，就必须为菌种提供富含营养物质的培养基。一般分为母种、原种和栽培种三种培养基，其配方组成、配制方法均不相同。

    灵芝生产中常用的化学消毒剂

　　1、氧化剂：常用的氧化剂有高锰酸钾、过氧化氢、臭氧、过氧乙酸、漂白粉、次氯酸和次氯酸盐等，这一类化学药剂能释放出氧或与其他物质反应产生氧，通过强烈的氧化作用，破坏微生物的原生质或酶蛋白质的结构。氯还能取代蛋白质氨基中的氢离子，使之变性。这类消毒剂对人毒性低，使用方便，杀菌效果较好，应用广泛。高锰酸钾多用2%~5%水溶液喷洒或用0.1%浸泡。过氧化氢常用1%浓度的水溶液，对器皿、用具等和操作者的手进行消毒；在灵芝子实体组织分离时，用20%浓度的过氧化氢水溶液浸子实体1~3分钟，达到表面消毒的效果。过氧乙酸的使用浓度为0.2%~0.5%，稀释液要随配随用，存放期不能超过3天，主要用于器皿、用具等表面消毒。漂白粉的常用浓度为5%，可以喷洒或浸泡灭菌。

2、还原剂：还原剂有亚硫酸、亚硫酸盐、甲醛等。它们的作用机制是还原作用和与菌体蛋白的氨基酸结合而使蛋白质变性。最常用的还原消毒剂有作为商品的福尔马林，其含37%~40%的甲醛溶液。0.1%~0·25%的甲醛溶液在6~12小时能杀灭细菌、芽孢及病毒。培养室、接种室消毒时，以福尔马林原液熏蒸，每立方米空间需6~10毫升福尔马林原液，再加1/10~1/5高锰酸钾，加热蒸发。5%的福尔马林溶液用于防腐。硫磺燃烧生成二氧化硫，二氧化硫遇水会形成亚硫酸。二氧化硫和亚硫酸都具有杀菌效力，故硫磺也属还原杀菌剂，常用于空间熏蒸。

3、重金属盐类：重金属离子易与带阴电荷的菌体蛋白结合，使之变性或发生沉淀。亦能与菌体酶蛋白中的-SH结合，使一些酶丧失活性，对微生物起到杀死或抑制作用。大多数重金属盐都是有效的杀菌剂。其中以汞、银、铜作用最强。常用的0.05%~0.1%的升隶溶液对灵芝子实体及寄主做表面消毒，也用于非金属器皿的消毒，对人、畜有剧毒，使用时要特别注意安全。波尔多液由重金属盐类硫酸铜与石灰配制而成，常用作培养室及床架的消毒。

　　4、酸碱类：酸及碱能将菌体物质分解以致其各种生物生理功能受到破坏。一般常用于消毒和防腐的酸碱有：醋酸、乳酸、丙二酸、苯甲酸、生石灰等。

　　5、醇类：醇是脱水剂。常用的消毒剂为70%~75%的乙醇，用于皮肤、器皿及真菌表面消毒。

　　6、酣类：常用消毒剂有1%~5%的苯酚，3%~5%的苯酚液对接种室和培养室进行喷雾以消毒空气和器械，0.5%~1%苯酚水溶液可用于皮肤消毒，但有刺激性。

　　灵芝退化现象的主要表现

　　菌丝体生长缓慢，菌丝纤细，稀疏，对环境、杂菌等的抵抗力变弱。过多的转代，会因菌丝长期处于活跃的营养生长状态，生命繁衍受到抑制，因此，转代次数应控制在2~3次之间。已经产生退化的菌种有必要继续保留时，则必须进行复壮。

　　防止灵芝菌种退化的措施

　　保证菌种的纯培养，注意不要用被杂菌污染的菌种；严格控制菌种转代次数，减少机械损伤，保证菌种活力；适当低温保存菌种。4℃时有利于保存菌丝体的活力。菌种不宜过长时间使用，生活力弱的菌种很容易出现退化；菌种要定期进行复壮。

　　制作灵芝菌种要准备的药品

　　1、消毒药品常用的消毒药品有甲醛、高锰酸钾、石炭酸、乙醇、新洁尔灭、升汞、漂白粉、过氧乙酸等。

　　2、化学药品经常的化学药品有：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、碳酸钙、磷酸钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硝酸钾、硫酸钙、硫酸镁、硫酸铵、盐酸及氢氧化钾等。

　　灵芝菌种纯化方法

　　在平面培养基上初分离出的菌种，经选择后再进行纯化培养以得到质量优良的纯菌种，称作纯化（也叫提纯）。由于受分离方法、培养基质及菌株自身生活力、生长势、发育程度等因素的影响，往往不同菌株的生态特性、品质优劣上有一些变异，因而需要再次纯化培养。菌种的纯化工作同样需在无菌条件下进行，当平面培养基上接种点处刚产生白色菌丝时，立即用接种针选择其中生长势旺盛部分，截取小块，尽量少带培养基，移入PDA斜面培养基试管中央，置25℃恒温了培养，经几次提纯转接，菌种无杂，生长正常，即为纯化的母种。

　　栽培过程中预防灵芝菌种污染的措施

　　1、严格选择菌种：如果发现和怀疑母种、原种污染，决不能转接到下一级菌种培养基上，如果棉塞吸潮生霉，也不能用作菌种转接，霉菌的孢子轻微振动，就会落在培养基或菌种上，一旦条件适合，会很快蔓延，严格选择菌种是防止污染的关键。

　　2、培养基灭菌要彻底：根据菌种不同培养基灭菌时间和压力、温度的要求也不同。严格掌握灭菌程序，时间过长会破坏培养基营养成分，灭菌时间不足，压力和温度未达到要求，灭菌不彻底，都会引起污染，尤其是常压灭菌，因时间较长，温度易忽高忽低，是生产中常引起污染的原因。如果发现一批菌种污染，或培养过程中瓶口上部目的菌种生长很好，而瓶底下层开始生霉菌，这都是灭菌不彻底所致。此外，高压灭菌锅与接种应尽量在相邻或在连接的一栋房子里，保持清洁的环境，使培养基冷却过程运量少暴露在露天里。直管培养基灭菌后，最好置于25℃恒温箱中培养24小时，取出后仔细检查培养基中有无杂菌污染，用以检查培养基是否灭菌彻底。

　　3、接种过程要严密：首先是接种间一定应保持灭菌彻底，一般情况下微生物的营养细胞经紫外线照射15~20分钟、芽孢照射30~40分钟即可杀死。但微生物是漂动在空气中的，一些紫外线照射不到的死角，如灯管上方及接种桌的下面微生物孢子都易漏网，为了灭菌彻底，在开启紫外灯前先喷5%石炭酸溶液，可杀死部分微生物，并可使空气中的灰尘吸附后落地，被紫外线杀死。接种时应严格按照无菌操作规程，除上述基本要求外，接种时不能在接种间走动、打闹、不能谈话说笑，操作技术应熟练，动作要稳、准、快。

　　4、创造最佳的培养条件：接种后一定要给灵芝菌种生长繁殖创造一个最有利的环境条件，促进灵芝菌种生长、抑制杂菌，并及时检查，发现有污染霉菌的菌种应及时清除，防止杂菌孢子传播。灵芝菌种生长速度快，早封瓶口能抑制杂菌生长，如果让霉菌占了优势，要培养的菌种就会明显地受到抑制。

灵芝的贮藏方法和注意事项

　　灵芝贮藏期间，若灵芝含水量较高（>13%），在梅雨季节和春夏之交尤其在南方密封不严受潮后，容易生长各种霉菌，引起灵芝发霉变质，降低灵芝品质。常见的霉菌有青霉、黄曲霉和木霉等。为了防止霉变发生，要确保灵芝贮藏时的含水量控制在13%以下，用塑料袋装灵芝密封，放在阴凉、干燥、环境的空气相对湿度要低于55%的库房里。随时检查，发现受潮后，及时取出烘干或者晾干。如果有低温的冷库可以使用最理想。

　　毛蕈甲的成虫和幼虫都可为害灵芝，将灵芝食成粉末状。此虫在仓库、地下室比较常见，比较耐干燥，能为害含水量低的灵芝，可以将包装用塑料袋咬破，在高温季节严重发生。为了避免此虫的发生，建议用较厚的塑料袋或复合膜封装灵芝，在装袋前将灵芝在60℃的烘干机内烘1小时，以杀死留在灵芝上的虫卵。仓库在使用前采用密闭熏杀。

　　栽培灵芝计算段木体积方法

　　一般段木如果直径10厘米，长15厘米左右，它的体积约为1200立方厘米，所以大约850个这样的段木折合1立方米。以此类推12厘米直径、15厘米长的短段木590段；15厘米直径，15厘米长的短段木434段为1立方米。一般每公顷需要200~300立方米段木。

　　灵芝栽培大棚的搭建和优点

　　建造栽培灵芝的大棚可使灵芝生长时有一个稳定的环境条件。建棚的大小、规模、材料和价格可以根据情况因地制宜。塑料大棚建造容易、使用方便，投资较少，是一种简易的保护地栽培设施。随着塑料工业的发展，被世界各国普遍采用。塑料大棚以塑料薄膜为覆盖材料，能充分利用太阳能，具有一定的保温作用，并通过卷膜在一定范围内调节棚内的温度和湿度。塑料大棚在北方地区可以起到春提早、秋延后的保温栽培作用，春季可提早30~50天，秋季能延后20~25天，但不能进行越冬栽培。在南方地区，除了冬春季节使用外，夏秋季节还可更换成遮阳棚，用于遮阴降温和防雨、防风、防雹等。塑料大棚一般室内不加温，靠温室效应积聚热量。塑料大棚透光率在60%~75%左右。为保证全天平均光照基本平衡，大棚平面布局多为南北延长的形式。

　　栽培灵芝的段木装袋灭菌

　　短段木用塑料绳或竹茨捆扎成捆，每捆直径依塑料袋大小而定。65厘米X85厘米的袋子每捆直径37~38厘米。捆扎时，段面要平，并用小段木或劈开的段木打紧。每袋装入捆扎好的段木。段木过干时，可将捆扎好的段木用清水浸泡24~36小时再装袋，然后把袋口扎紧，每袋装1捆段木。段木装好后，在段木上铺一薄层木屑培养基，利于菌丝生长，然后将袋口扎紧，放入灭菌锅灭菌。

　　袋栽灵芝栽培料装袋方法

　　选用新鲜不发霉的木屑，过筛，清除木块等杂物，棉籽壳用前在日光下暴晒两天。按其配方，将木屑、棉籽皮、鉄皮、石膏等先拌均匀，再将其他辅料放入水中，拌入主料，使其含水量达到60%~65%。以配制100千克棉籽皮，麸皮培养基干料为例：分别按比例称取棉籽皮77千克，麸皮22千克，过磷酸钙1千克。接着将称好的棉籽皮及麸皮混匀；过磷酸钙则先溶于水中，然后倒入干料中反复拌匀。加水至手捏培养料只见指缝间有水痕而不滴水为宜（加水约60千克左右）。培养料的pH为6~7为宜。闷30分钟后拌料。如果有条件，可用搅拌机进行拌料。

　　拌料时，将料和水一起放入搅拌机内，拌料30分钟。最后，进行装袋即可。裁好塑料袋后，先将一头用绳扎紧，然后将拌好的培养料装入袋中。

　　装料时，注意料内混有尖硬杂物，刺破菌袋。料要装实，上下松紧一致，装好后用手指轻压袋料，料装到离袋口8厘米处时，将袋口内空气挤出后用绳扎紧。装袋时既要保证质量，又要保证速度，尽量在较短时间内完成，因为培养料放久了会变酸。要轻装轻压，用力过猛容易导致菌袋出现破损，排出袋内空气后扎牢袋口，这样在灭菌时就不会出现袋内气体膨胀而使袋口敞开的情况了。

　　装料要适量，如果装料过满，影响扎袋口；如果装料过少，不能充分利用菌袋，会影响产量。

　　装好袋后，放在合适的地方，注意防止杂物将袋刺破，导致污染。也可用装袋机装料。

　　袋栽灵芝出灵芝期环境管理

　　1、温度：温度高于30℃或低于22℃时，灵芝生长明显减慢，出现减产现象。温度越高，产量越低，畸形芝增多，质量下降。出蕾后到子实体成熟期间最适温度尽量控制在26~28℃。

　　2、湿度：出现菌蕾后，每天定期在棚内喷雾状水，棚内相对湿度保持在80%~90%。空气相对湿度超过95%时，容易感染杂菌和害虫，造成畸形或死亡。喷水时不要让泥土溅在灵芝菌盖上。

　　3、光照：光照要求达到300~1000勒克斯，避免阳光直射。灵芝出蕾后，菌柄的生长和菌盖的分化与光照有直接关系。如光照不足，只长菌柄，菌盖分化困难，灵芝发育不正常。如果光照增强，菌盖形成快，菌柄短，菌盖色深而有光泽。

　　4、通风：灵芝棚内二氧化碳过高，则只长菌柄，不分化菌盖，大部分形成畸形鹿角。特别在高温高湿时，为减少杂菌危害，要加强通气管理。

　　袋栽灵芝发菌期的管理方法

　　培养室或塑料大棚内先打扫干净，不留卫生死角。在菌袋搬入前12小时，熏蒸消毒。内设床架，把接种后的菌袋可放在架子上，进行发菌。

　　培养温度控制在24~30℃范围，以25~28℃最好。超过33℃菌丝长势弱，容易老化，容易感染杂菌，因此及时采取降温措施，如加强通风。如果温度低于22℃，生长缓慢，应设法升温。

　　培养时空气相对湿度要求在50%左右，空气相对湿度大，容易发生杂菌，若培养湿度过高，要加强通风降温。培养后期可增加空气相对湿度。

　　要定期翻堆：一般在接种7天内不要翻动。7天以后，检查污染情况和菌丝生长状况。一般每隔7天检查一次。翻堆过程中要上下内外调换位置，以便保持温度一致，有利菌丝均匀生长。翻堆时如果发现感染杂菌的栽培袋应及时处理。

　　培养期间结合温度、湿度情况进行通风换气，保持空气新鲜，室内培养每天通风3~4次，每次20~40分钟。防止室温过高而烧死菌丝，要注意通风降温。整个菌丝生长阶段，都要避光培养。光线过强抑制菌丝生长。当菌丝生长至1/3以上或1/2时，可根据情况松动袋口以利通气，促使形成菌蕾。

　　袋栽灵芝灭菌方法

　　在装锅时，注意料袋不要重叠堆积，装量不宜过满，要留有余地，塑料袋间应有间隙。可选用常压或高压灭菌方法。常压灭菌锅内温度可达105℃必须灭菌8~10小时，然后再封火维持10小时以上。如果用高压蒸汽灭菌锅，应在放冷气后，在1.5千克/厘米2压力下，保持2.0小时。停火后菌袋冷却到25℃左右时即可出锅。出锅时应尽量保持清洁，迅速运往无菌室接种。

　　灵芝培养料堆积发酵方法

　　灵芝培养料堆积发酵含水量应调至65%以上，用pH9~10石灰水拌料，拌匀后堆积。选向阳、地势高的地方，每平方米堆拌好的料50千克左右，堆成长条形，堆好稍拍实，然后每隔0.5米用直径3~4.5厘米木棍打孔，用塑料膜覆盖升温，当料温上升到40~60℃，经36小时翻堆一次，翻堆外层料一定翻到里面，再按翻堆前要求堆好，当料温再次升到40~60℃时经24小时后可进行装袋，装袋前测试调整培养料含水量达60%，pH6左右即可装袋。

　　采用短段木栽培灵芝菌丝培养方法

　　接种后的短段木菌袋，搬入通风干燥的培养室或室外培养场地，要求室内较暗处培养，放室外要有遮雨、保湿、遮阴措施。菌袋依品字形摆放，气温低于20℃时，应加温，保持室温22~25℃。接种后的15天内是管理的关键，这阶段的管理主要是通风、降湿、防霉菌。菌丝生长中后期若发现袋内大量水珠产生，则要加强通风或降温，每天午后开门窗通风换气1~2小时。一般培养20天左右菌丝便可长满整个锻木表面。通过开门窗换气增加袋内氧气，促进菌丝向木质部深层生长。短段木在室内培养周期约1.5~2个月，气温低可稍长些。少数接种后污染严重的段木，可把污染物清除干净后重新灭菌接种。

　　短段木栽培灵芝出芝期管理技术

　　灵芝子实体形成为恒温结实型，正常的生长温度为18~34℃，最适范围为26~28℃。经过埋土后，如气温持续在25℃以上，通常20天左右即可形成菌蕾。菌蕾露土时顶部呈白色，基部为褐色。菌柄长到一定长度，当通气量、温度、湿度、光照等条件都适宜时即分化出菌盖。可见子实体管理重点是水分、通气、光照。

　　1、水分：根据土质、气温、荫棚保湿程度、子实体长势等情况，判断喷水量。在菌蕾露土，菌盖出现前，保持棚内相对湿度达80%~90%，土壤呈疏松湿润状态。子实体发生多时要多喷水。常保持空气的相对湿度85%~95%。晴天多喷水；气温低、阴雨天、土质较黏时少喷水或不喷水。选用较细喷头进行喷雾，让雾点自由落下。菌盖成熟一孢子飞散及子实体采收应停喷水或少喷水。

　　2、通气：灵芝为好气真菌，一般情况下，应打开通气窗全天通气。气温高时注意降温并加大通气量。气温低时可定时通气，一般通3次以上，每次1小时。如果空气中C02浓度增至0.3%以上，则只长菌柄，不分化菌盖。为减少杂菌为害，在高温高湿时要加强通气管理。

　　3、光照：灵芝要有一定散射光照，光照要求达到300~1000勒克斯，但要避免阳光直射。出芝过程中要避免雨水直接淋在畦上，造成土壤湿度过大影响子实体质量。还要注意防止子实体相连，当两相邻芝体十分接近时，应及时旋转改变段木位置，防止连体芝的出现。灵芝生长对光照相当敏感，搭荫棚。如过阴，灵芝子实体柄长盖细小，再加上通气不良和CO2浓度高，则形成“鹿角芝”。光线控制总的原则是前阴后阳，前期光照度低有利于菌丝的恢复和子实体的形成，后期应提高光照度，有利于灵芝菌盖的增厚和干物质的积累。

　　短段木栽培灵芝埋土方法

　　宜选择温暖通风，排水方便，地势开阔，土质疏松，偏酸性砂质土（pH5.5~6.5），若酸性偏重的每亩用石灰10~15千克调低酸度到合适范围。水源方便，靠近菌木培养场所及遮阴材料容易获得的疏林地或田地里为埋土场地。使用时间一般为2~3年。

　　灵芝埋土前的栽培场地于晴天翻土深30厘米，去除杂草石块、日光暴晒数日后做畦。畦宽通常1~1.5米，畦高10~15厘米，畦长依场地而定。一般以10~15米为宜，畦间留45厘米左右作业道。场地四周开好排水沟，畦以南北走向为好。

　　耕种帮建议在畦上方应搭棚，采用宽幅塑料布封顶，薄膜上再用草帘覆盖以减少亮度和降低辐射热。荫棚要求保温、保湿、通气良好。当气温稳定在20℃以上时，可将长满菌丝的短段木埋土。应根据段木品种、直径大小、菌丝生长的好坏分别埋土，以保证出芝整齐，便于管理和采收。选择晴天埋土，在整好的畦上先开沟，沟深20厘米，然后将段木接种的一端朝下立于沟内，两段木间距10~12厘米，行距12厘米，上覆土1~2厘米，然后再覆以1厘米沙子，防止喷水时泥土溅在子实体上。埋土完毕后，应浇一次水。气温低可以用与畦面相当大小的薄膜覆盖。

　　栽培灵芝的段木灭菌方法

　　高压灭菌要求1.5千克/厘米2的压力，保持1.5小时；如果是常压，100℃土锅灭菌，需要至少保持24小时。可以采用常压间歇式灭菌，常压100℃土锅灭菌，保持8小时，中间隔10小时再100℃保持6小时，这样的效果比较好。另外，高压灭菌时蒸气压上升和下降速度必须缓慢，不能采用排气降压，要让其自然降压。

　　灵芝接种箱消毒灭菌方法

　　在无超净工作台的地方，采用人工制作的接种箱进行接种。一般先在接种箱中铺一层聚丙烯塑料布，把冷却的培养袋和准备好的容器，菌种袋放入。接种箱熏蒸应封闭严密，按每立方米用甲醛10毫升，高锰酸钾5克混合消毒，1.5小时后接种。为防止杂菌产生抗药性也可用硫磺熏蒸交替进行。硫磺每立方米20克放于盒内点燃，能有效除杂菌。

　　灵芝孢子破壁方法介绍

　　灵芝孢子的外部包裹了两层坚坚韧的外壁，灵芝孢壁结构复杂且耐酸碱，既坚硬且有韧性，影响了孢子内含物的释放。所以采用破壁，更便于吸收利用。灵芝孢子粉破壁方法有生物酶解法、化学法、物理法等，其中效果较好且不破坏孢子有效成分的方法为超低温物理破壁技术。值得注意的是，破壁灵芝孢子粉很容易与空气中的氧分子产生化学反应，因此，破壁后的孢子最好隔绝空气（如采取充氮等措施），低温保存。

　　灵芝孢子破壁方法对比

　　物理法：灵芝孢子粉的破壁技术其实很好理解，只是将包裹有效成分的坚硬植物几丁质外壁打开而已。而人们最先想到的无非是敲开，利用机器碾磨的方法，将外壁打开，但这种方法的破壁效果不好，而且重金属含量也会有超标的奉献。

　　生物酶解法：生物酶解法以及化学法，利用特殊的生物酶或者化学制剂，将灵芝孢子粉的外壁溶解掉，破壁效果虽然有了一定的提升，但后续会有有部分药剂或许化学残留，还会破坏灵芝孢子粉的有效成分。

　　超低温物理破壁法：在超低温环境下，我们利用气流对灵芝孢子粉进行破壁，这种方法的破壁效果十分理想，并且对有效成分以及灵芝孢子粉本身无任何的污染以及后续加工，避免了重金属或者化学残留的侵害。

　　灵芝采收后的烘干

　　采收灵芝子实体后应及时晒干或烘烤干，彻底干燥是保证质量和保藏的关键。采收后的鲜芝不应用手接触菌盖下方，也不应使子实体相互碰撞。灵芝子实体不能用水洗，剪去过长的菌柄后，去除泥沙和其他杂质，单个排列放于铺席上，在晒干期间仍继续弹射孢子，为了收集孢子粉可在席上铺一层塑料膜，以便收集孢子。

　　灵芝晒干或烘干。一般应先晒后烘，利用夏季阳光强烈，先单个排在铺席上暴晒1~2天后集中在55~65℃烘房内烘烤1~2小时。全靠日晒时，应常翻动芝体，一般4~5天能晒干。灵芝直接烘干时，烤房温度由40℃逐渐上升到65℃，通常烘12~14小时。在灵芝子实体含水量达11%~12%时为宜。将整好的灵芝子实体彻底晒干后按要求规格分级，分别装于塑料袋内封口保藏，严防受潮和回潮。

　　用段木栽培灵芝接种方法

　　灵芝的接种需要在无菌条件下接种，一般要安排3人，其中一人搬段木打开袋口，一人接种，一人扎袋口绳，接种时应从段木两端进行，均匀接入菌种。每根段木的接种种量约需5~10克。接种后，接种口仍按接种前一样封好。接种完毕后，立即将菌段木送入发菌室培养。一般1立方米段木约需菌种量100袋。750毫升菌种瓶用种量80~100瓶。

　　1、分离材料的选择与消毒

　　灵芝孢子分离的材料，来自于多年人工栽培的优良品系和野生的种。在同一个生长条件下，栽培同一种灵芝不同的品系，其生产效益和品质有很大差异；而同一个品系栽培在不同的环境条件下，其优良性状表现也不同，就是在相同环境条件下栽培的同一个品系，其单株之间也会出现差异。因此，应选择长期栽培优良品种的优良单株，作为分离材料。野生的菌株，未经过人工栽培，不知其优良性状、抗逆能力和生产性能如何，只能作为育种搜集原始材料时进行孢子分离，经过培养品系之间对比试验，选择优良者进行孢子分离，经过培养品系之间对比试验，选择优良者进行生产，在选优去劣的培养过程中，再在群体中选择优良个体，作为孢子分离的材料。

　　理想的用于分离的灵芝子实体，应该是具有该品种主要典型的特征，发育正常，个体健壮，无病虫害，成熟适度的子实体。选定后，及时采摘进行消毒。可剪去菌柄的2/3，用清水洗去沾附的污物，浸入0.1%的升汞溶液中1~2分钟或70%的酒精浸几秒到1分钟，取出后用无菌水反复冲洗数次，用灭菌的纱布或滤纸吸干表面水分后待用。

　　2、灵芝孢子的采集

　　用于分离的灵芝子实体经消毒处理后，即可采用孢子弹射法收集孢子，即利用孢子自动弹射出子实层的特性，采集孢子。一般采用全部操作过程都应该在无菌条件下进行。

　　①贴附法。取一块经消毒的成熟子实体，用灭菌的琼脂或浆糊，黏附在装有PDA培养基的试管斜面或培养皿皿盖正上方，加棉塞或盖皿盖后置室温下培养，待孢子自然落下后，在无菌室内镊除子实体小块，或将落有孢子的培养基转移在新的试管斜面及培养皿平板培养基上，加塞或加盖后继续培养。

　　②孢子印采集法。取成熟的子实体经表面消毒后，切去菌柄，置于灭过菌的白色或黑色蜡光纸上，罩上通气钟罩，在24℃下静置数小时后，轻轻移去子实体，可见有大量孢子落在纸上。将有孢子印的纸在无菌条件下保存备用。

　　③空中孢子捕捉法。灵芝子实体成熟后，孢子大量弹射，在子实体周围可见烟雾状的“孢子云”，将准备好的培养基平板或试管口迎着“孢子云”方向，使孢子附着在培养基表面，随即盖下皿盖或加棉塞即可。

　　3、灵芝孢子的分离

　　采集到的孢子，一般需要经过分离选择后，才能制作原种。孢子的分离根据接种到培养基上的孢子数量而分单孢分离和多孢分离两种。灵芝的孢子分离多采用多孢分离法。多孢分离方法简单、易操作，没有不孕现象，在生产上常采用。多孢分离因采收孢子的方式不同，可分直接培养法、斜面划线法、涂布分离法。

　　①直接培养法。采用孢子弹射分离法、菌褶涂抹法及捕捉法收集到培养基上的孢子，直接放在25℃下培养，待孢子萌发后挑选特征典型的菌落，转接培养即可。

　　②斜面划线法。在无菌条件下，用接种针沾取少量收集到的孢子，在PDA斜面培养基上自下而上划线，划线时不要太用力，以能划破培养基表面力度。接种后加棉塞，置适温下培养，待孢子萌发后，挑选萌发早，生长旺盛的菌落，转接到新试管斜面培养基上再行培养即可。

　　③涂布分离法。在无菌条件下，用接种环挑取少许收集到的孢子，装入有无菌水的试管中，充分摇匀制成孢子悬浮液，然后用无菌的注射器或滴管，吸取孢子悬浮液，注入1~2滴于斜面或平板培养基表面，用无菌接种环涂匀，置适温下培养。孢子萌发后，挑选发育匀称，生长快的菌落，再移接到新试管斜面培养基上，恒温培养即得母种。

　　为了进行菌丝观察或育种少量也采用单孢分离：即从采集到的孢子群中，挑出单个孢子进行培养，单独萌发成菌丝而获得纯菌种的方法。按分离手段可分为稀释法、划线法、毛细管分离法和器械分离法。